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Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞說明書

Rosetta(DE3) Competent Cell

Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

目錄號：YJ0811

保存條件：-80℃保存。

組分說明

               Cat. No.                              YJ0811A

               Size                                   10×100 μl

               Rosetta (DE3) Competent Cell           10×100 μl

               Control DNA pUC19，0.1 ng/μl              10 μl

產(chǎn)品簡介

　　本產(chǎn)品是采用進(jìn)口Rosetta菌株，經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA

的熱擊轉(zhuǎn)化。Rosetta菌株是攜帶氯霉素抗性質(zhì)粒BL21的衍生菌，補充大腸桿菌缺乏的

6種稀有密碼子（ AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA）對應(yīng)的tRNA，提高外源

基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平。使用  pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可

達(dá)10 7

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途

    注意事項

    1．感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在  -80℃下保存，不可多次凍融和放

       置時間過長，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

    2．轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作。

    3．包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

    操作步驟

    1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。

       以下實驗以50 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

    2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量

       的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。

    3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。

    4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

    5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的   SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，

       倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。

注意：1）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少，可通過離心（4,000 rpm，2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。

       2）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

       3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。