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通用型DNA純化回收試劑盒說明書
更新時(shí)間:2015-05-21 點(diǎn)擊量:1425

                         通用型DNA純化回收試劑盒說明書

 

 Universal DNA Purification Kit

 

目錄號(hào):  YJ0519

保   存:  室溫

 

組分說明

 

                                         Cat.No.                   YJ0519

                                          KitSize                     50

                                         BufferPC                   50ml

                                         BufferPS                   15ml

                                BufferPW(concentrate)                10ml

                                         BufferEB                   10ml

                                     SpinColumnDM                   50

                                 CollectionTube(2ml)                 50

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

   本試劑盒采用新型硅基質(zhì)膜及特殊的緩沖液系統(tǒng),專一的結(jié)合 DNA,既能從瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段,又能直接純化 PCR  產(chǎn)物與酶反應(yīng)物中的單鏈、雙鏈 DNA,可zui大限度地去除引物、酶、礦物油、瓊脂糖等雜質(zhì),獲得高純度的DNA,滿足多種實(shí)驗(yàn)要求。本試劑盒可回收 50bp-50kb 的 DNA 片段,每個(gè)吸附柱zui高可吸附 20 μg 的 DNA,且 DNA回收效率高達(dá) 90%。由本試劑盒回收純化的 DNA 可直接用于酶切、連接、PCR 擴(kuò)增、DNA 測(cè)序等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

 

注意事項(xiàng)

 

1.  *次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在BufferPW中加入無(wú)水乙醇。

 

2.  使用前請(qǐng)檢查BufferPC是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象,可在37℃水浴幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。

 

3.  電泳時(shí)使用新的電泳緩沖液,以免影響電泳和回收效果。

 

4.  切膠時(shí),紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短,以免對(duì)DNA造成損傷。

 

5.  回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān)。

 

6.  所有離心步驟均在室溫下進(jìn)行。

 

自備試劑:無(wú)水乙醇,離心管  

 

 

操作步驟

 

1. 樣品處理

 

   A 從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段

 

   a1. 將單一目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下(盡量切除多余凝膠部分),放入干凈的離心管(自備)中,稱取凝膠重量。 

 

        注意:若膠塊的體積過大,可將膠塊切成碎塊。

 

   a2. 向膠塊中加入3倍凝膠體積的Buffer PC;當(dāng)瓊脂糖凝膠濃度>2%時(shí),建議使用6倍凝膠體積的  Buffer PC(如凝膠重為100mg,其體積可視為100μl,依此類推)。

 

   a3.50℃孵育10分鐘,其間不斷溫和地上下顛倒離心管,以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊,可再補(bǔ)加一些溶膠液或繼續(xù)放置幾分鐘,直至膠塊*溶解。

 

       注意:1)在膠充分溶解后檢測(cè)pH值,若pH值大于7.5,可向含有DNA的膠溶液中加10-30μl 的3M醋酸鈉(pH5.0)將pH值調(diào)到5-7

             2)吸附柱的容積是 700μl,若樣品體積大于 700μl 可分批加入。

 

             3)膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因?yàn)槲街谳^高溫度時(shí)結(jié)合 DNA 的能力較弱。

 

   a4.(可選步驟)當(dāng)回收片段<500bp或>4kb時(shí),應(yīng)加入1倍膠體積的異丙醇,上下顛倒混勻(如凝膠為100mg,則加入100μl異丙醇)。

 

       注意:當(dāng)回收片段為500bp-4kb時(shí),加入異丙醇不會(huì)影響回收率。

 

   B 從PCR反應(yīng)液或酶反應(yīng)液中回收DNA

   b1.計(jì)算PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積,向其中加入5倍PCR反應(yīng)液或酶反應(yīng)液體積的 Buffer PC,充分混勻(無(wú)需去除石蠟油或礦物油)。

 

    例如:100 μl的PCR樣本中加入500μlBufferPC(不包括石蠟油或礦物油)。

2. 柱平衡: 將吸附柱(SpinColumnDM)放入收集管(CollectionTube)中,向吸附柱中加入200 μl Buffer PS,12,000 rpm(~13,400×g)離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 

3. 將從a3或b1中所得溶液加入到平衡好的吸附柱(已裝入收集管)中,室溫放置2分鐘,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

 

    注意:吸附柱容積為700μl,若樣品體積大于700μl 可分批加入。

 

4. 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液。

 

    注意:如果純化的DNA用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)(例如平末端連接或直接測(cè)序),建議加入BufferPW靜置2-5分鐘再離心。

5. 將吸附柱放回收集管中,12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘,以*晾干。

 

     注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響,建議將吸附柱開蓋,置于室溫放置數(shù)分鐘,以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

 

6.  將吸附柱放到一個(gè)新離心管(自備)中,向吸附膜中間位置加入30-50 μl Buffer EB(pH8.5)或水(pH7.0-8.5),室溫放置2分鐘。12,000rpm離心2分鐘,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。

 

    注意:1)洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)。

 

          2)為了提高DNA的回收量,可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,重復(fù)步驟6。

 

          3)洗脫體積不應(yīng)小于30μl,體積過少會(huì)影響回收效率。

 

          4)如果使用TE洗脫,需要考慮其中含有的EDTA是否會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)。

 

          5)回收大于10kb的DNA片段時(shí),BufferEB應(yīng)在50℃水浴中預(yù)熱,適當(dāng)延長(zhǎng)吸附和洗脫時(shí)間,可增加回收效率。

 

 

       

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