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游離脂肪酸(FFA)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書
更新時(shí)間:2019-12-11 點(diǎn)擊量:3928

游離脂肪酸(FFA)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

微量法

 

FFA 既是脂肪水解的產(chǎn)物,又是脂肪合成的底物。血清中 FFA 的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān)。

測(cè)定原理:

FFA 與銅離子結(jié)合形成脂肪酸銅鹽,并溶于lv仿;利用銅試劑法測(cè)定銅離子含量,即可推算出游離脂肪酸含量。

自備儀器和用品:

研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、一個(gè) 25 mL 玻璃瓶、兩個(gè) 10 mL 玻璃瓶、正庚烷、無(wú)水甲醇、lv仿(三氯甲烷)、無(wú)水乙醇和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1 瓶,室溫保存。

試劑二:自備。實(shí)驗(yàn)前1 d,加入9.6 mL正庚烷,0.4 mL無(wú)水甲醇,10 mL lv仿(自備), 蓋緊后混勻,室溫保存。

試劑三:液體×1 瓶,室溫保存。

試劑四:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前在試劑瓶中加入4 mL無(wú)水乙醇,充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 瓶,室溫保存。臨用前加入7.8 mL LV仿充分溶解,即為500µmol/L 的棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

樣品中 FFA提?。?/span>

1、血液中 FFA 測(cè)定:將所取血液,室溫靜置 1 h 后,于 4 ℃ 離心機(jī) 3 500 rpm 離心 15min, 取上層血清置于-20℃冰箱保存,待測(cè)。

2、組織中 FFA 含量測(cè)定:組織用生理鹽水沖洗干凈后,用吸水紙吸取表面水分,按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,入 1mL 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿,8000rpm,4℃離心 10min,取上清液,待測(cè)。

3、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體(mL)為500~1000:1 的比例建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 試劑一冰浴超聲波破碎細(xì)胞功率 300w,超聲 2 秒,間隔 3秒,總時(shí)間 3min);然后 8000rpm,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。

測(cè)定:

  • 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 550 nm,蒸餾水調(diào)零。
  • 空白管:取0.5mL EP管,加入 2µL 蒸餾水,100µL 試劑二,40µL 試劑三,

蓋緊后充分震蕩混勻(2min),靜置5 min,取上層清液50µL于0.5mLEP管,加入100µL 試劑二,40µL 試劑四,混勻后倒入微量石英比色皿/96 孔板,靜置 15min,于 550nm 光吸收,記為 A 空白管。

  • 標(biāo)準(zhǔn)管:取 0.5mL EP管,加入 2µL 標(biāo)準(zhǔn)液,100µL 試劑二,40µL 試劑三,

 

蓋緊后充分震蕩混勻(2min),靜置5 min,取上層清液50µL于0.5mLEP管,加入100µL 試

劑二,40µL 試劑四,混勻后倒入微量石英比色皿/96 孔板,靜置 15min,于 550nm 光吸收,記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

  • 測(cè)定管:取 0.5mL EP 管,加入2µL上清液,100µL 試劑二,40µL 試劑三,

蓋緊后充分震蕩混勻(2min),靜置5 min,取上層清液50µL于0.5mLEP管,加入100µL 試劑二,40µL 試劑四,混勻后倒入微量石英比色皿/96 孔板,靜置 15min,于 550nm 光吸收,記為 A 測(cè)定管。

FFA 含量計(jì)算:

a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 血液中 FFA 含量計(jì)算

FFA(µ mol/L)=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×1 L

=500×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) C 標(biāo)準(zhǔn)液:500µmol/L;1 L:指每升樣品。

2. 組織中 FFA 含量計(jì)算

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

FFA(µ mol/mg prot)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)] ÷Cpr

=0.5×(A測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr

(2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算

FFA(µ mol/g mass)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×V樣總÷W

=0.5×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷W

3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

FFA(µ mol/104cell)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×V 樣總

÷細(xì)胞數(shù)量=0.5×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

C 標(biāo)準(zhǔn)液:500µmol/L;1 L:指每升樣品;V 樣總:上清液總體積,1 mL=0.001L;Cpr:本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。

b. 使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 血液中 FFA 含量計(jì)算

FFA(µ mol/L)=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×1 L

=500×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) C 標(biāo)準(zhǔn)液:500µmol/L;1 L:指每升樣品。

2. 組織中 FFA 含量計(jì)算

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

FFA(µ mol/mg prot)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]÷Cpr

=0.5×(A測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr

(2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算

FFA(µ mol/g mass)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×V樣總÷W

=0.5×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷W

3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

FFA(µ mol/104cell)=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×V 樣總÷細(xì)胞數(shù)量=0.5×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

 

C 標(biāo)準(zhǔn)液:500µmol/L;1 L:指每升樣品;V 樣總:上清液總體積,1 mL=0.001L;Cpr:樣

本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。

注意事項(xiàng):

1. 試劑四配制應(yīng)盡量晚配,在操作到加入試劑三時(shí),再配制試劑四。

2. 該試劑盒不可用塑料比色皿和 96 孔板測(cè)定,需用玻璃比色皿。

總抗氧化能力試劑盒說(shuō)明書(可見(jiàn)分光光度法)

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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