久久久久亚洲AV无码专区首,午夜不卡AV免费,久久夜色精品国产嚕嚕亚洲AV,高清欧美性猛交XXXX黑人猛交

網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > 線粒體復(fù)合體Ⅱ試劑盒說明書 微量法
產(chǎn)品目錄
線粒體復(fù)合體Ⅱ試劑盒說明書 微量法
更新時間:2019-11-21 點擊量:1920

貨號:YJ1347                                                   規(guī)格:100管/96樣

線粒體復(fù)合體Ⅱ試劑盒說明書

微量法

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

線粒體復(fù)合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q還原酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,催化琥珀酸氧化生成延胡索酸,同時輔基FAD還原為FADH2,后者進一步還原氧化型輔酶Q生成還原型輔酶Q,是呼吸電子傳遞鏈的支路。

測定原理:

復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q可進一步還原2,6-二氯吲哚酚,2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰,通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計算該酶活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體 100mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑二:液體 20mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑三:液體 1.5mL×1 支,-20℃保存;

試劑四:液體 25mL×1 瓶,4℃保存;

試劑五:粉劑×1 支,-20℃保存;

試劑六:液體 2.5mL×1 瓶,4℃保存;

樣本的前處理:

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1、準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿 600g,4℃離心5min。

3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。

4、上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅱ(此步可選做)。

5、步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復(fù)30次),用于復(fù)合體Ⅱ酶活性測定。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至605nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

(1)工作液的配制:臨用前把試劑五轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min;用不完的試劑4℃可保存一周;

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、25μL試劑六和200μL工作液,立即混勻,記錄605nm處初始吸光值A(chǔ)1和2min后的吸光值A(chǔ)2,計算ΔA=A1-A2。

 

復(fù)合體Ⅱ活力單位的計算:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。復(fù)合體Ⅱ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=559×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅱ活力(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=113×ΔA÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅱ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.226×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2.35×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×104 L/ mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。

b.使用96孔板測定的計算公式如下:

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅱ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=1118×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅱ活力(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=226×ΔA÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅱ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.452×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2.35×10 -4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù),2.1×10 4 L/ mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202mL;T:反應(yīng)時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500 萬。

總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)試劑盒說明書(微量法)

AxyPrep 無內(nèi)毒素質(zhì)粒大量試劑盒

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

被黑人姿势猛到抽搐视频 | 韩国三级大全久久网站| 亚洲 都市 校园 激情 另类| 国产三级做爰在线观看∵| AV鲁丝一区鲁丝二区鲁丝三区 | 国产精品久久久久久亚洲毛片 | 毛片免费看| 粗大的内捧猛烈进出小视频| 成熟人妻换╳╳╳╳| 人妻无码久久中文字幕专区| 扒开腿狂躁女人视频免费| 国产精品精品一区二区三区| 两个男用舌头到我的蕊花| 看看视频APP在哪里可以下载 | 久久AV色欲AV久久蜜桃| 被喂春药蹂躏的欲仙欲死视频| 国产免费久久精品99久久| 国产成人AV片无码免费| 日产欧产美韩系列| 欧美熟妇搡BBBB搡BBBB| 天码AV无码一区二区三区四区| 久99久无码精品视频免费播放| JAPAN丰满人妻HDXXXX| 久久久久亚洲AV无码专区| 成年免费视频黄网站在线观看| 久久久久国产精品免费A片| 超碰97免费人妻| 再深点灬舒服灬太大了嗯| 欧美疯狂XXXXBBBB喷潮| 两腿间花蒂被吸得肿了视频| 粗大猛烈进出高潮口述感觉| 国产精品久久久久久人妻| 亚洲国产精品无码久久| 老太婆XXX性视频XX在线| 放荡的闷骚娇妻H| 亚洲AⅤ在线无码播放毛片一线天| 色一情一乱一伦一区二区三区| 妽妽用身体满足了我| 丰满风流护士长BDA片| 日本真人做人爱120分钟| 成人做受120视频试看|