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氨芐青霉素快速檢測試劑盒說明書
更新時間:2019-04-22 點擊量:1590

                   

氨芐青霉素

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物氨芐青霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氨芐青霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物氨芐青霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物氨芐青霉素的含量。

二、試劑盒特性

  1. 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
  2. 孵育溫度:       25
  3. 孵育時間:       30min30min15min
  4. 樣本檢測下限

組織  ················································  2ppb

  1. 交叉反應(yīng)率

氨芐青霉素·   ········································  100%

氨芐氨芐青霉素········································  0.8%

鄰氯氨芐青霉素 ·······································  0.2%

雙氯氨芐青霉素 ·······································  0.1%

阿莫西林  ·········································  0.1%

頭孢塞呋  ·········································  0.1%

  1. 樣本回收率

組織 ·········································  60%-120%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12條

2

標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶標(biāo)記物

12ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

10X濃縮復(fù)溶液

50ml

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱

微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl

      劑:氫氧化鈉、濃鹽酸

五、樣本前處理步驟

  1. 樣本處理前須知

(a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。

  1. 樣本前處理需配制:

配液 1   0.2M 鹽酸

取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L

配液 2   1 M 氫氧化鈉

稱 4g 氫氧化鈉固體加去離子水定容至100ml

配液 3   樣本稀釋液

將10X濃縮復(fù)溶液與去離子水 1:9 稀釋后用

  1. 組織樣本(豬肉、豬肝、雞肉、雞肝等)的處理方法

1、稱 1±0.05g 均質(zhì)后的組織至50ml離心管中,加入2ml 0.2M鹽酸(見配液1),充分振蕩3min;

2、再加入400µl 1M 氫氧化鈉(見配液2)溶液和1.6ml樣本稀釋液(見配液3)溶液,充分振蕩3min,室溫4000r/min 以上離心 5min;

3、取上清液,用樣本稀釋液按1:2(50µl樣本液加100µl樣本稀釋液)稀釋,混合30s;取50 µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):15        

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

  1. 測定前應(yīng)須知:
  1. 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20~25)。
  2. 使用之后立即將所有試劑放回2~8。
  3. 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
  4. 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
  1. 操作步驟:
  1. 從2~8冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~25)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  2. 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8。
  3. 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
  4. 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
  5. 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻。25環(huán)境中反應(yīng)30min。
  6. 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板4~5次,每次間隔15~30秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  7. 每孔加入酶標(biāo)記物100µl,蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液充分洗,4~5遍(同上),用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
  8. 顯色:加入底物A液50µl/孔,再加入底物B液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min
  9. 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內(nèi)讀數(shù)),測定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含氨芐青霉素量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.1ppb為1.816;0.3ppb為1.415;0.9ppb為0.74;2.7ppb為0.313;8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb~8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb~0.9ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氨芐青霉素實際濃度。

2、定量分析

(1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光(%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以氨芐青霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氨芐青霉素實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

八、 注意事項

  1. 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
  2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
  3. 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
  4. 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
  5. 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
  6. 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
  7. 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。
  8. 該試劑盒jia反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

  1. 儲藏條件:試劑盒于2-8保存,不要冷凍。
  2.  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。

 

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滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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